18/06/2019
☑️ تکنیک Real Time PCR
روشی مبتنی بر روش PCRمی باشد چرا که در روش Real Time PCR نیز همانند PCR یک توالی هدف به کمک پرایمرهای اختصاصی تکثیر می گردد. اما تفاوت Real Time PCR با PCR معمولی در سنجش برخط و کمی توالی تکثیر شده می باشد. مبنای سنجش در روش Real Time PCR ایجاد سیگنال ناشی از نشانگر های فلورسنت است که ضمن ردیابی تکثیر محصول، امکان سنجش های چندگانه (سنجش چند آنالیت به طور همزمان) را فراهم می آورند.
روش ریل تایم به دو دسته تقسیم بندی می شود:
روش اول: استفاده از نشانگرهای فلورسنت غیر اختصاصی با استفاده از رنگ های باند شده بهDNA مانند (SYBR® Green) و یا اوا گرین. (Eva green) روش دوم: استفاده از نشانگرهای فلورسنت اختصاصی با استفاده از شناساگرهای (پروب) ژن هدف.
در این روش از تعدادی شناساگر الیگونوکلئوتیدی (probe) استفاده می شود. شناساگرهای مورد استفاده در این روش شامل: Molecular Beacons , TaqMan® Probes FRET Hybridization Probes و Scorpion® Primers می باشند.
امروزه Real Time PCR به عنوان یکی از تکنیک های مرجع در بسیاری از حوزه های حساس و پر اهمیت همچون تشخیص بیماری ها، مطالعات در سطح ژنوم، بررسی بیان ژن ها، کنترل کیفی داروها و فراورده های زیستی، بررسی اثربخشی داروها و ... مورد استفاده قرار می گیرد و توانسته است علاوه بر افزایش چشمگیر حساسیت و دقت آنالیزها، مدت زمان دسترسی به نتایج و مقدار نمونه لازم به ازای هر آزمون را به میزان قابل توجهی کاهش دهد.