13/04/2026
Biến nạp và sàng lọc dòng
Trong các bước trước, việc lựa chọn chủng và thiết kế vector biểu hiện đã được thực hiện nhằm kiểm soát phần lớn hiệu quả của quá trình thí nghiệm. Sau khi hoàn thành các bước này, giai đoạn tiếp theo là đưa vector mang gen mục tiêu vào tế bào chủ để tiến hành nhân bản.
Biến nạp (Transformation) là quá trình đưa DNA ngoại lai, cụ thể là plasmid mang gen mục tiêu, vào tế bào vi khuẩn như E. coli hoặc Bacillus. Đây là bước quan trọng trong quy trình tạo dòng, tuy nhiên có thể phát sinh nhiều sai sót nếu không được thực hiện và kiểm soát đúng cách.
Sau khi biến nạp và nuôi cấy trên môi trường thạch, các khuẩn lạc hình thành không đồng nhất về mặt di truyền. Cụ thể, mỗi khuẩn lạc có thể:
Mang plasmid chứa gen mục tiêu đúng như thiết kế
Mang plasmid bị sai cấu trúc, tái tổ hợp không mong muốn hoặc mất đoạn DNA
Do đó, cần thực hiện bước sàng lọc để xác định các dòng vi khuẩn mang plasmid chính xác.
Các phương pháp sàng lọc sau biến nạp
Sàng lọc kháng sinh:
Plasmid biểu hiện thường chứa gen kháng kháng sinh. Sau biến nạp, tế bào được nuôi trên môi trường có chứa kháng sinh tương ứng. Chỉ những tế bào nhận được plasmid mới có khả năng sinh trưởng và tạo khuẩn lạc. Phương pháp này giúp loại bỏ các tế bào không mang plasmid, tuy nhiên không phân biệt được plasmid đúng hay sai cấu trúc.
Colony PCR (PCR khuẩn lạc):
Phương pháp này được sử dụng để kiểm tra nhanh sự hiện diện của gen mục tiêu và kích thước sản phẩm khuếch đại. Đây là phương pháp có thời gian thực hiện ngắn, chi phí thấp và phù hợp để sàng lọc số lượng lớn mẫu.
Cắt bằng enzyme giới hạn (Restriction digestion):
Phương pháp này cho phép đánh giá cấu trúc plasmid, bao gồm vị trí và chiều gắn của gen mục tiêu. Kỹ thuật này hữu ích trong trường hợp cần kiểm tra các khả năng tái tổ hợp sai hoặc gắn nhầm đoạn DNA.
Giải trình tự DNA (Sequencing):
Đây là bước xác nhận cuối cùng để kiểm tra chính xác trình tự nucleotide của gen mục tiêu. Phương pháp này đặc biệt cần thiết trước khi tiến hành các bước biểu hiện protein, nhằm đảm bảo không có sai lệch trong trình tự gen.
👉 Dịch vụ dòng hóa - biểu hiện & tinh sạch protein tái tổ hợp HTBiotec
Thiết kế Vector & Tối ưu hóa Codon.
Biểu hiện Protein.
Tinh sạch Protein.
Phân tích hoạt tính và nồng độ.
📍 Địa chỉ: 465/12/6A Trần Xuân Soạn, P. Tân Hưng, TP.HCM
📞 Hotline: +84 327 411 272
🌐 Website: www.htbiotec.vn
📩 Email: [email protected]