HTBiotec, 465/12/6A Trần Xuân Soạn, Phường Tân Hưng, Tp. Hồ Chí Minh, Ho Chi Minh City (2026)

Name: HTBiotec
Address: 465/12/6A Trần Xuân Soạn, Phường Tân Hưng, Tp. Hồ Chí Minh, Ho Chi Minh City, 72911, VN
Telephone: +84339285028

13/04/2026

Biến nạp và sàng lọc dòng

Trong các bước trước, việc lựa chọn chủng và thiết kế vector biểu hiện đã được thực hiện nhằm kiểm soát phần lớn hiệu quả của quá trình thí nghiệm. Sau khi hoàn thành các bước này, giai đoạn tiếp theo là đưa vector mang gen mục tiêu vào tế bào chủ để tiến hành nhân bản.

Biến nạp (Transformation) là quá trình đưa DNA ngoại lai, cụ thể là plasmid mang gen mục tiêu, vào tế bào vi khuẩn như E. coli hoặc Bacillus. Đây là bước quan trọng trong quy trình tạo dòng, tuy nhiên có thể phát sinh nhiều sai sót nếu không được thực hiện và kiểm soát đúng cách.

Sau khi biến nạp và nuôi cấy trên môi trường thạch, các khuẩn lạc hình thành không đồng nhất về mặt di truyền. Cụ thể, mỗi khuẩn lạc có thể:

Mang plasmid chứa gen mục tiêu đúng như thiết kế
Mang plasmid bị sai cấu trúc, tái tổ hợp không mong muốn hoặc mất đoạn DNA

Do đó, cần thực hiện bước sàng lọc để xác định các dòng vi khuẩn mang plasmid chính xác.

Các phương pháp sàng lọc sau biến nạp

Sàng lọc kháng sinh:
Plasmid biểu hiện thường chứa gen kháng kháng sinh. Sau biến nạp, tế bào được nuôi trên môi trường có chứa kháng sinh tương ứng. Chỉ những tế bào nhận được plasmid mới có khả năng sinh trưởng và tạo khuẩn lạc. Phương pháp này giúp loại bỏ các tế bào không mang plasmid, tuy nhiên không phân biệt được plasmid đúng hay sai cấu trúc.
Colony PCR (PCR khuẩn lạc):
Phương pháp này được sử dụng để kiểm tra nhanh sự hiện diện của gen mục tiêu và kích thước sản phẩm khuếch đại. Đây là phương pháp có thời gian thực hiện ngắn, chi phí thấp và phù hợp để sàng lọc số lượng lớn mẫu.
Cắt bằng enzyme giới hạn (Restriction digestion):
Phương pháp này cho phép đánh giá cấu trúc plasmid, bao gồm vị trí và chiều gắn của gen mục tiêu. Kỹ thuật này hữu ích trong trường hợp cần kiểm tra các khả năng tái tổ hợp sai hoặc gắn nhầm đoạn DNA.
Giải trình tự DNA (Sequencing):
Đây là bước xác nhận cuối cùng để kiểm tra chính xác trình tự nucleotide của gen mục tiêu. Phương pháp này đặc biệt cần thiết trước khi tiến hành các bước biểu hiện protein, nhằm đảm bảo không có sai lệch trong trình tự gen.
👉 Dịch vụ dòng hóa - biểu hiện & tinh sạch protein tái tổ hợp HTBiotec
Thiết kế Vector & Tối ưu hóa Codon.
Biểu hiện Protein.
Tinh sạch Protein.
Phân tích hoạt tính và nồng độ.
📍 Địa chỉ: 465/12/6A Trần Xuân Soạn, P. Tân Hưng, TP.HCM
📞 Hotline: +84 327 411 272
🌐 Website: www.htbiotec.vn
📩 Email: [email protected]

30/03/2026

TỔNG QUAN VỀ HỆ THỐNG VECTOR BIỂU HIỆN TRONG CÔNG NGHỆ GENE
Việc lựa chọn vector phù hợp với tế bào chủ là yếu tố quyết định hiệu suất tổng hợp protein tái tổ hợp. Dưới đây là phân tích các đặc tính kỹ thuật của hai hệ thống biểu hiện phổ biến nhất hiện nay:

1. Hệ thống biểu hiện tại Escherichia coli (Gram âm)
Escherichia coli là mô hình tế bào chủ ưu việt nhờ tốc độ sinh trưởng nhanh và hệ thống di truyền ổn định. Hiệu quả biểu hiện của các dòng vector như pET hay pBAD phụ thuộc vào sự tương tác giữa Promoter và Origin of Replication (Ori).
Hệ thống Promoter:
T7: Có hoạt tính phiên mã cực mạnh, phụ thuộc vào T7 RNA polymerase, thường được sử dụng trong các dòng tế bào chuyên dụng như BL21(DE3).
lac/lacUV5: Điều hòa bằng chất cảm ứng IPTG, có tính phổ biến cao trong nghiên cứu cơ bản.
araBAD: Điều khiển bởi đường L-arabinose, cho phép tinh chỉnh mức độ biểu hiện và kiểm soát chặt chẽ quá trình phiên mã.
Điểm khởi đầu sao chép (Ori):
pUC: Duy trì số lượng bản sao rất cao (500-700 bản sao/tế bào).
ColE1 / pMB1: Số lượng bản sao ở mức trung bình - cao.
p15A: Số lượng bản sao thấp, tối ưu cho việc biểu hiện các protein gây độc hoặc giảm tải trọng chuyển hóa cho tế bào.

2. Hệ thống biểu hiện tại Bacillus subtilis (Gram dương)
Khác với vi khuẩn Gram âm, Bacillus sở hữu khả năng bài tiết protein trực tiếp ra môi trường ngoại bào, giúp đơn giản hóa quy trình tinh sạch sản phẩm.
Hệ thống Promoter:
Pgrac: Promoter lai (hybrid) thế hệ mới, được thiết kế từ promoter mạnh groE của B. subtilis kết hợp với trình tự toán tử lacO từ E. coli.
Cho phép cảm ứng mạnh mẽ bằng IPTG. Đây là hệ thống có hiệu suất biểu hiện rất cao, độ ổn định tốt và khả năng kiểm soát chặt chẽ, khắc phục được nhược điểm của các promoter truyền thống trong Bacillus.
P43: Promoter mạnh cho phép biểu hiện liên tục mà không cần tác nhân cảm ứng.
PxylA: Điều hòa bởi đường xylose.
Pspac: Promoter lai giữa phage SP01 và toán tử lac, cảm ứng bằng IPTG.
PaprE / PamyQ: Liên kết với trình tự tín hiệu tiết, hỗ trợ vận chuyển protein ra khỏi tế bào.
Điểm khởi đầu sao chép (Ori):
pUB110: Đảm bảo tính ổn định cao với số lượng bản sao trung bình.
pE194: Duy trì số lượng bản sao thấp, hạn chế áp lực lên quá trình sinh trưởng của vật chủ.

3. Vector con thoi (Shuttle Vector)
Trong thực tiễn nghiên cứu, do hiệu suất biến nạp trực tiếp vào Bacillus thường thấp, chiến lược sử dụng Shuttle Vector là giải pháp tối ưu. Cấu trúc này tích hợp đồng thời:
Ori cho E. coli: Hỗ trợ giai đoạn nhân dòng và khuếch đại DNA plasmid.
Ori cho Bacillus: Đảm bảo sự duy trì và biểu hiện protein đích sau khi chuyển đổi hệ thống chủ.
Sự kết hợp linh hoạt giữa các yếu tố điều hòa và đơn vị sao chép chính là chìa khóa để tối ưu hóa quy trình sản xuất protein trong công nghệ sinh học hiện đại.
👉 Dịch vụ dòng hóa - biểu hiện & tinh sạch protein tái tổ hợp HTBiotec
Thiết kế Vector & Tối ưu hóa Codon.
Biểu hiện Protein.
Tinh sạch Protein.
Phân tích hoạt tính và nồng độ.
📍 Địa chỉ: 465/12/6A Trần Xuân Soạn, P. Tân Hưng, TP.HCM
📞 Hotline: +84 327 411 272
🌐 Website: www.htbiotec.vn
📩 Email: [email protected]

23/03/2026

Thiết kế gene: bước quyết định 70% khả năng ra protein.
Rất nhiều dự án biểu hiện protein trên E. coli hoặc Bacillus thất bại, dù:
gene “đúng”
vector “xịn”
induce đủ kiểu nhiệt độ, IPTG
Vấn đề thường không nằm ở bước biểu hiện, mà nằm ngay từ khâu thiết kế gene vì gene được thiết kế chưa phù hợp với host. Những điều này liên quan đến lựa chọn codon usage cho host.
Codon usage là gì?
Là cách một sinh vật “ưu tiên dùng” các codon khác nhau để mã hoá cùng một amino acid.
Ví dụ: Amino acid Leucine (Leu) có 6 codon (UUA, UUG, CUU, CUC, CUA, CUG), nhưng E. coli thích dùng CUG, một số codon khác thì rất hiếm gặp sử dụng.
Với E. coli và Bacillus, codon usage khác nhau hoàn toàn. Một gene tối ưu cho E. coli có thể biểu hiện kém, không biểu hiện, protein rất yếu khi biểu hiện trên Bacillus và ngược lại.
Vì vậy:
- Gene cho E. coli → Optimize theo E. coli
- Gene cho Bacillus → Optimize riêng cho Bacillus
Một thiết kế gene tốt cho E. coli hoặc Bacillus thường đã được xử lý:
- Giảm codon hiếm liên tiếp
- Tránh vùng mRNA tạo cấu trúc thứ cấp mạnh ở đầu 5’
- Tránh trình tự gây bất ổn di truyền
Làm đúng từ gene = tiết kiệm rất nhiều thời gian và chi phí thử sai sau này.

02/03/2026

E.coli hay Bacillus? Đừng chọn host biểu hiện protein theo thói quen.
1️⃣ Escherichia coli (E. coli)
E. coli là hệ biểu hiện phổ biến vì tốc độ sinh trưởng nhanh (20–30 phút/chu kỳ), chi phí nuôi cấy thấp và hệ công cụ rất đầy đủ (nhiều chủng như BL21(DE3), Rosetta; promoter mạnh như T7; nhiều thẻ tinh sạch). Phù hợp với protein nội bào kích thước nhỏ–trung bình, không cần glycosyl hóa, ít hoặc không có cầu disulfide và không yêu cầu tiết ra môi trường. Tuy nhiên, do bào tương có tính khử mạnh và có màng ngoài, E. coli thường khó biểu hiện protein có nhiều cầu disulfide, dễ tạo thể vùi, không tan hoặc mất hoạt tính; đồng thời phải phá tế bào và loại bỏ nhiều tạp nội bào khi tinh sạch.

2️⃣ Bacillus subtilis (Bacillus)
Bacillus có lợi thế lớn ở khả năng tiết protein trực tiếp ra môi trường nhờ hệ signal peptide và không có màng ngoài. Điều này giúp không cần phá tế bào, giảm tạp nội bào và rút ngắn quy trình tinh sạch. Hệ này phù hợp với protein ngoại bào và nhiều enzyme công nghiệp; quá trình tiết và môi trường ngoại bào có tính oxy hóa hơn nên một số protein có cầu disulfide cho dạng tan và có hoạt tính tốt hơn so với E. coli. Tuy nhiên, Bacillus cần thiết kế tối ưu riêng (codon, signal peptide, promoter, chủng giảm protease); nếu áp dụng tư duy thiết kế của E. coli, hiệu suất tiết có thể thấp hoặc protein bị phân hủy.

Kết luận: E. coli phù hợp cho protein nội bào đơn giản và cần triển khai nhanh; Bacillus phù hợp khi cần tiết protein hoặc xử lý protein ngoại bào/phức tạp hơn. Chọn đúng host ngay từ đầu giúp tiết kiệm thời gian và chi phí.
📍 Địa chỉ: 465/12/6A Trần Xuân Soạn, P. Tân Hưng, TP.HCM
📞 Hotline: +84 327 411 272
🌐 Website: www.htbiotec.vn
📩 Email: [email protected]

09/02/2026

[HTBiotec-Dịch Vụ]GIẢI PHÁP TOÀN DIỆN CHO PROTEIN TÁI TỔ HỢP – TỪ GENE ĐẾN SẢN PHẨM TINH SẠCH 🧬

Bạn đang tìm kiếm đối tác tin cậy để tối ưu hóa quy trình sản xuất protein? HTBiotec tự hào mang đến dịch vụ End-to-End Recombinant Protein Services với tiêu chuẩn quốc tế ngay tại Việt Nam.

Tại sao nên chọn HTBiotec?
✅ Đội ngũ chuyên gia: Hơn 20 năm kinh nghiệm.
✅ Hệ thống biểu hiện đa dạng: Tối ưu trên Escherichia coli và Bacillus subtilis.
✅ Công nghệ hiện đại: Tinh sạch bằng hệ thống ÄKTA Avant (IMAC, IEX, SEC).
✅ Cam kết chất lượng: Bàn giao sản phẩm kèm dữ liệu phân tích và báo cáo kỹ thuật chi tiết.

👉 Dịch vụ của chúng tôi bao gồm:

Thiết kế Vector & Tối ưu hóa Codon.

Biểu hiện Protein.

Tinh sạch Protein.

Phân tích hoạt tính và nồng độ.

⏱ Thời gian: 6 - 12 tuần. 💰 Chi phí: Linh hoạt theo độ phức tạp (70 - 300 triệu VND).

📍 Địa chỉ: 465/12/6A Trần Xuân Soạn, P. Tân Hưng, TP.HCM
📞 Hotline: +84 327 411 272
🌐 Website: www.htbiotec.vn
📩 Email: [email protected]

Address

465/12/6A Trần Xuân Soạn, Phường Tân Hưng, Tp. Hồ Chí Minh
Ho Chi Minh City
72911

Telephone

+84339285028

Website

https://maps.app.goo.gl/pkKG4qtVychG3sxw9, http://htbiotec.vn/

Alerts

Be the first to know and let us send you an email when HTBiotec posts news and promotions. Your email address will not be used for any other purpose, and you can unsubscribe at any time.

Contact The Business

Send a message to HTBiotec:

HTBiotec